Kolorimetrik yöntem - araştırılan ve bilinen maddelerin renk doygunluğunun karşılaştırmasına dayanan bir analiz. Fiziksel ve kimyasal testlerin sonuçları birçok bilim dalı için büyük değer taşır, ancak tüm araştırmaların çoğu tıpta kullanılır.
Kolorimetrik yöntemin özü
Maddelerin kimyasal bileşimini belirleyen birçok test türü vardır. Bazıları evrenseldir ve çeşitli alanlarda yaygın olarak kullanılır, diğerleri ise daha yüksek doğrulukla spesifiktir. Kolorimetrik yöntem evrenseldir.
Analizin özü, konsantrasyonu bilinmeyen bir çözeltinin renk doygunluğunun standart bir çözeltinin rengiyle karşılaştırılmasıdır. Analiz sırasında, araştırılan bileşenin belirli bir reaktif ile etkileşimi sonucunda renkli bir bileşik oluşur. Reaksiyonun tamamlanmasından sonra, elde edilen gölge, konsantrasyonu zaten bilinen çözeltilerin rengiyle karşılaştırılır.
Kolorimetrinin kurucusunun Robert Boyle olduğuna inanılıyor. Sıkma kullandıÇözeltideki demiri bakırdan ayırt etmek için tanenler. Çözeltideki demir konsantrasyonu ne kadar yüksek olursa, ikincisinin tonunun o kadar zengin olduğunu fark eden Boyle'du.
Kolorimetri
Kolorimetri, çözeltilerdeki bir maddenin miktarını belirlemek için kullanılan bir yöntemdir. Analiz Bouguer-Lambert-Beer yasasına dayanmaktadır: bir ışık demeti bir maddenin yoğun emici tabakasına çarptığında yoğunluğu zayıflar.
Bir maddenin konsantrasyonunu belirlemeye yönelik kolorimetrik yöntem, renk yoğunluğunu ölçmek için özel aletler kullanarak görsel bir karşılaştırma veya karşılaştırma kullanabilir. Karşılaştırma doğrudan ve telafi edici bir şekilde yapılır.
- Düz. Yöntem, sıvının belirli bir yoğunluk ve sıcaklığındaki test çözeltisinin renk seviyesinin bir referans çözelti ile karşılaştırmasını içerir. Fotokolorimetreler ve spektrofotometreler kullanıldığında, referans çözelti olarak damıtılmış su kullanılır. Cihazlar, ışığın yoğunluğuna bağlı olarak akımın yoğunluğunu ölçer.
- Telafi edici. Yöntem, çalışılan numunenin renginin referansa getirilmesine dayanmaktadır. Sonuç, bir çözücü ilave edilerek veya lekeli ortamın tabakasının yüksekliği artırılarak elde edilir.
Spektrofotometre, monokromatör ve diğer hassas aletlerin kullanılması, zaten basit olan araştırma yöntemini daha da basitleştirir ve sonuçların doğruluğunu artırmanıza olanak tanır. Bu cihazlar, ışık iletim miktarını ölçebilir ve dalga boyunu belirleyebilir.
Analizin uygulandığı yer
Kolorimetrik analiz yöntemi, kimyasal bileşimin tam olarak bilindiği, karşılaştırma için bir referans numunenin bulunduğu ve test ile referans numunenin sıcaklığının aynı olduğu durumlarda kullanılır. Renkli bir maddenin miktarını hızlı bir şekilde belirlemeniz gerekiyorsa, ancak çok küçükse, analitik yöntemi uygulamak imkansızdır.
Kolorimetri, tıpta klinik biyokimyasal araştırmalar ve diğer alanlarda yaygın olarak kullanılmaktadır:
- ilaç endüstrisi;
- gıda ve alkol endüstrisi;
- agronomi (toprak kalitesinin belirlenmesi).
Artıları ve eksileri
Kolorimetrik yöntemin de diğer yöntemler gibi artıları ve eksileri vardır.
Avantajları şunları içerir:
- analiz kolaylığı, minimum hazırlık prosedürleri;
- az miktarda test malzemesiyle bile test imkanı;
- Pahalı ekipmanlara gerek yok, son zamanlarda ucuz olmayan modern cihazlar giderek daha fazla kullanılıyor olsa da. Ama en doğru sonucu sağlarlar.
Dezavantajları: Analitik yöntemlere kıyasla düşük analiz doğruluğu.
Protein tayini için biuret yöntemi
Kan serumunda bulunan protein, homeostaz durumunu yansıtan bir göstergedir. Kandaki makromoleküler bir bileşiğin konsantrasyonundaki artışa hiperproteinemi, düşük içeriğe ise hipoproteinemi denir.
Proteinlerkan serumu farklı bir bileşime, yapıya, özelliklere sahiptir, farklı işlevleri yerine getirir. Enzimlere, hormonlara, immünoglobulinlere ve diğerlerine ayrılırlar. Tüm protein grupları, biyolojik sıvılardaki makromoleküler organik bileşiklerin belirlenmesi için geliştirilen yöntemler temelinde bir takım ortak özelliklere sahiptir.
Klinik biyokimyadaki tüm yöntemlerden en sık olarak proteini belirlemek için kolorimetrik yöntemler kullanılır. Bütçe kuruluşları için önemli olan nispeten ucuzdurlar. ve oldukça basittirler. En yaygın olanı biüret yöntemidir. Yöntemin özü: alkali bir ortamdaki proteinler, bakır sülfat ile reaksiyona girer ve mor bileşikler oluşturur. Kandaki protein içeriği, boyamanın doygunluğu ile belirlenir. Analiz için biyomateryal sabahları aç karnına alınır.
Analiz oldukça doğrudur, ancak kandaki protein konsantrasyonunu etkileyen faktörler vardır:
- biyomalzeme örneklemesinden kısa bir süre önce fiziksel aktivite;
- hamileliğin ve emzirmenin son haftaları;
- Corticotropin, Miscleron, Clofibrate ilaçlarının kullanımı kandaki protein içeriğini arttırır ve Pyrazinamide ve östrojen kullanımı - konsantrasyonu az altmak için;
- biyomalzeme örneklemesi sırasında yanlış el pozisyonu.
Demir tayini
Kandaki demir miktarı çeşitli hastalıkların teşhisinde ana göstergelerden biridir. Madde, oksijenin dokulara taşınmasını sağlayan hemoglobinde yoğunlaşmıştır. İçindemirin kolorimetrik yöntemle belirlenmesi, çoğunlukla ana reaktif olarak bir banyofenantrolin çözeltisi (% 0.02) kullanılır. Biyomateryal - hemoliz izi olmayan serum.
Yöntemin özü: demir iyonları ve sülfatlanmış batofenantrolinin etkileşimi, doygunluğu fotometrik olarak belirlenen renkli bir kompleks oluşturur. Berrak bir çözüm elde etmek için, biyomalzeme örnekleme kurallarına uymak gerekir, ancak demir-ligand komplekslerinin optik yoğunluklarını doğru bir şekilde belirlemek için demir, hidroksilamin ve deterjanlar (sodyum dodesil sülfat) kullanılarak hemoglobinden salınır. Test sonucu patolojinin varlığını ve derecesini belirler. Normal demir konsantrasyonu şöyle olmalıdır:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (erkek);
- 10, 6- 21, 7 µmol/L (kadınlar).
Demir eksikliği genellikle kan kaybı, yetersiz diyet alımı veya gastrointestinal sistemden zayıf emilim ile ilişkilidir.
Kolesterol testi
Kolesterol, insanlar dahil birçok organizmanın hücre duvarında bulunan organik bir maddedir. Kolekalsiferol ve steroid hormonlarının üretimi için gereklidir. 3.37-5.2 mmol/L kolesterol seviyesi normal kabul edilir. Yüksek içerik, aterosklerozun ana nedenlerinden biridir.
Kolesterolü belirlemeye yönelik kolorimetrik yöntemler, damar hastalıklarını erken bir aşamada tanımanıza olanak tanır. İskeminin ölümcül sonucu olan patoanatomik sonuçlara göre hastalarda lipofilik alkol konsantrasyonu6.5-7.8 mmol/L idi.
Kolorimetrik yöntemin prensibi, kolesterolün 3beta-hidroksi-steroid oksidoredüktaz tarafından oksitlenmesi ve p-aminoatipirini renkli bir bileşiğe dönüştüren hidrojen peroksit salmasıdır. Kolesterol içeriği, renginin doygunluğu ile belirlenir.
Bir çocukta test yapılırken, çocukluktaki kolesterol konsantrasyonunun 4,1 mmol / l'yi geçmemesi gerektiği dikkate alınmalıdır.
Enzimatik kolorimetrik yöntem nedir?
Enzimatik testler, yüksek aktiviteye sahip enzimler tarafından reaksiyonların kullanılmasına dayanır. Nitrat iyonlarından makromoleküllere kadar çeşitli maddeleri belirlemek için analitik kimyada yaygın olarak kullanılırlar.
Enzimatik (enzimatik) yöntemler spesifiktir ve belirli maddelerin bileşiminde benzer diğer maddelerin varlığında analiz edilmesini sağlar. Enzim - glikoz oksidaz kullanımına dayanan en yaygın yöntemler. Test, kandaki glikoz konsantrasyonunu belirlemek için kullanılır. Testin doğruluğu, tip 2 diyabetli hastalarda hipoglisemik ajanların dozajını ayarlamak için kullanılmasına izin verir.
Glikoz oksidan yöntemi, glikozu belirlemek için en iyi kantitatif yöntemlerden biri olarak kabul edilir. Hem kan (kılcal damar) hem de serum biyomateryal olarak kullanılabilir, ancak plazma daha çok tercih edilir çünkü hematokrit içeriği daha düşüktür ve bu da sonucun doğruluğunu olumsuz etkiler.
Kinetik fotometri yöntemi esas olarak kullanılır. Özü şu gerçeğinde yatmaktadır:belirlenen glikoz oksidaz ve peroksidaz oranı, reaksiyonun başlamasından sonra belirli bir süre için, renkli bir bileşiğin oluşum hızı numunedeki glikoz seviyesi ile orantılı olacaktır. Testin ana avantajı, sonucun numunede üçüncü taraf bileşiklerin varlığından etkilenmemesidir. Yöntemin bir dezavantajı da vardır - test için Alman veya İsveçli üreticilerin pahalı ölçüm cihazları gereklidir.
Sonuç
Kolorimetrik yöntem doğru ve kullanımı kolaydır. Tıpta kullanımı vücuttaki çeşitli patolojik değişikliklerin erken tespitini sağlar. Yeni teknolojilerin tanıtılmasıyla, yöntem geliştirilmekte ve giderek daha popüler hale gelmektedir.
