Son zamanlarda, çeşitli insan bulaşıcı hastalıklarının teşhisi için güvenilir, oldukça hassas ve hızlı bir yöntem geliştirilmiştir. Bu yönteme "PCR analizi" denir. Nedir, özü nedir, hangi mikroorganizmaları ortaya çıkarabilir ve nasıl doğru bir şekilde alınır yazımızda anlatacağız.
Keşif geçmişi
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemini 1983 yılında Amerikalı bilim adamı Kary Mullis tarafından icat etti. Başlangıçta, tanı yönteminin patenti, yaratıcısının çalıştığı Cetus Corporation tarafından alındı. Ancak 1992'de tüm haklar ve patentler Hoffman-La Roche'a satıldı. Daha sonra benzer çalışmaların paralel olarak yürütüldüğü ve Alice Chen, David Edgar, John Trell gibi diğer Amerikalı biyologlar tarafından kaydedildiği ortaya çıktı. 1980'de Sovyet bilim adamları A. Slyusarenko, A. Kaledin ve S. Gorodetsky de bu sorunu ele aldı. Bu nedenle, tek telif hakkı sahibini belirlemek imkansızdı. Birçok önde gelen biyokimyacı, polimeraz zincir reaksiyonu tekniğinin geliştirilmesine belirli bir katkıda bulunmuş ve yeniliklerinin patentini almıştır. Şu anda, analizPCR her yerde özel donanımlı laboratuvarlarda gerçekleştirilir.
PCR tanı yönteminin özü
PCR analizi: nedir ve nasıl çalışır? Yöntemin özü, özel bir DNA polimeraz enzimi kullanarak yapay koşullar altında belirli bir mikrobiyal ortamın hacmini arttırmaktır. Bunun için mevcut DNA materyali defalarca çoğ altılır. Böylece numunede patojen bir mikroorganizma varlığında biyokimyasal laboratuvar manipülasyonları nedeniyle miktarı artacak ve bakteriyi mikroskop altında tespit etmek zor olmayacaktır.
Materyal araştırması nasıl yapılır?
Analiz için gerekli:
- DNA matrisi;
- bir malzeme parçasının uçlarını birleştiren astarlar;
- ısıya dayanıklı DNA polimeraz enzimi;
- enzimlerin düzgün çalışmasını sağlayan kimyasallar;
- DNA materyalinin büyümesi ve gelişmesi için uygun koşulları yaratmak için gerekli tampon çözelti.
PCR gerçekleştirmek için, üç aşamadan oluşan 25-30 tekrar yapılır: denatürasyon, tavlama ve uzama.
Polimer zincir reaksiyonunun analizi için özel bir cihaz kullanılır - bir amplifikatör. Modern ekipman, teşhis sırasında hataları ortadan kaldırmak için ısıtma ve soğutma boruları için gerekli programı ayarlamanıza olanak tanır.
Tanılama nerede kullanılır?
Polimer zincir reaksiyonu yöntemi tıbbın çeşitli alanlarında kullanılmaktadır:
- suçlularsaç, tükürük veya kan gibi genetik materyali tanımlar;
- PCR kan testi, örneğin belirli bir ilaca karşı genetik olarak doğal bir reaksiyonu tespit etmek için genotiplemeye yardımcı olur;
- insanlar arasında aile bağlarının varlığını kurmak için bu yöntemi kullanmak;
- Çeşitli bulaşıcı hastalıkları belirlemek için tıbbi teşhiste en popüler PCR yöntemi haline geldi.
PCR hangi enfeksiyonları saptar?
Yani, tıp uzun süredir PCR analizini başarıyla kullanıyor. Ne olduğunu zaten biliyoruz. Ve onunla hangi patojenler tespit edilebilir? Aşağıdaki bulaşıcı hastalıklar PCR yöntemiyle teşhis edilir:
- hepatit A, B, C;
- ureaplasmosis;
- kandidiyazis;
- klamidya;
- mikoplazmoz;
- gardnerellosis;
- bulaşıcı mononükleoz;
- trichomoniasis;
- papillomavirüs enfeksiyonu;
- tüberküloz;
- herpes enfeksiyon tipleri 1 ve 2;
- helikobakteriyoz;
- sitomegalovirüs;
- difteri;
- salmonelloz;
- HIV enfeksiyonu.
Ayrıca kanser teşhisinde PCR yöntemleri kullanılmaktadır.
Yöntem avantajları
PCR teşhisinin çeşitli avantajları vardır:
- Yüksek hassasiyet. Sadece birkaç mikroorganizma DNA molekülünün varlığında bile, PCR analizi enfeksiyonun varlığını belirler. Yöntem, kronik ve geç ortaya çıkan hastalıklara yardımcı olacaktır. Genellikle bu gibi durumlarda, mikroorganizmaaksi takdirde ekilemez.
- Tükürük, kan, genital salgılar, saç, epitel hücreleri gibi herhangi bir materyal araştırmaya uygundur. En yaygın olanı PCR için kan ve ürogenital yayma analizidir.
- Uzun vadeli kırpma gerekmez. Otomatik teşhis süreci, çalışmanın sonuçlarını 4-5 saat sonra almanızı sağlar.
- Yöntem neredeyse %100 güvenilirdir. Yalnızca izole yanlış negatif sonuç vakaları kaydedildi.
- Tek bir malzeme örneğinden çeşitli patojen türlerini tanımlama yeteneği. Bu sadece hastalığın teşhis sürecini hızlandırmakla kalmaz, aynı zamanda malzeme maliyetlerini de önemli ölçüde az altır. Genellikle doktor kapsamlı bir PCR analizi önerir. Altı patojenin belirlenmesinden oluşan muayenenin fiyatı yaklaşık 1.500 ruble.
Analiz hazırlığı için öneriler
PCR çalışması sırasında sonuçların güvenilir olması için, tanı için ön hazırlık önerilerini izleyerek teste girmeniz gerekir:
- Tükürük bağışından önce, numune almadan 4 saat önce yemek yemekten ve ilaç almaktan kaçınmalısınız. İşlemden hemen önce ağzınızı kaynamış su ile çalkalayın.
- Yanağın iç yüzeyinden örnek alınırken de yukarıdaki kurallara uyulmalıdır. Durulamadan sonra, bezin salgısını vurgulamak için hafif bir cilt masajı yapılması önerilir.
- İdrar genellikle evde toplanır. Bunu yapmak için kapsamlı bir tuvalet yapmanız gerekir.cinsel organlar. 50-60 ml idrarı steril plastik bir kapta toplayın. Malzemenin saflığını sağlamak için kadınların vajinaya tampon yerleştirmesi, erkeklerin deri kıvrımını mümkün olduğunca geri çekmesi önerilir. Regl döneminde bağış yapmayın.
- Sperm bağışlamak için numune almadan önce 3 gün cinsel ilişkiden kaçınmalısınız. Doktorlar ayrıca saunayı ziyaret etmemeyi ve sıcak banyo yapmamayı, alkol ve baharatlı yiyecekler içmeyi tavsiye ediyor. Testten 3 saat önce idrar yapmaktan kaçınmalısınız.
- Örneğin ürogenital smear almak için, örneğin klamidya için PCR testi yapılırsa, hem kadınların hem de erkeklerin 3 gün cinsel dinlenmeleri önerilir. Antibakteriyel ilaçlar analizden 2 hafta önce alınmamalıdır. Bir hafta boyunca samimi jeller, merhemler, vajinal fitiller, duş kullanmayı bırakmanız gerekir. Muayeneden 3 saat önce idrar yapmaktan kaçınmalısınız. Adet sırasında örnekleme yapılmaz, kanın kesilmesinden sadece 3 gün sonra ürogenital smear alabilirsiniz.
hamilelik sırasında PCR
Bebeğin beklendiği dönemde cinsel yolla bulaşan birçok enfeksiyon, fetüsün normal gelişimi için son derece tehlikelidir. STD'ler intrauterin büyüme geriliği, düşük veya erken doğum, çocuğun konjenital malformasyonlarını provoke edebilir. Bu nedenle erken gebelikte PCR muayenesinden geçmek son derece önemlidir. Kayıt sırasında analizi geçmek gereklidir - 12 haftaya kadar.
Malzeme özel bir fırça kullanılarak servikal kanaldan alınır. İşlem ağrısızdır ve bebek için tehlike oluşturmaz. Genellikle hamilelik sırasında, PCR yöntemiyle klamidya ve ayrıca üreaplazmoz, mikoplazmoz, sitomegalovirüs, herpes, papilloma virüsü için bir analiz yapılır. Böyle bir muayene kompleksine PCR-6 denir.
HIV teşhisi için PCR
Polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi vücuttaki değişikliklere ve teşhis koşullarına çok duyarlı olduğu için birçok faktör sonucu etkileyebilir. Bu nedenle HIV enfeksiyonu için PCR analizi güvenilir bir yöntem değildir, etkinliği %96-98'dir. Vakaların geri kalan %2-4'ünde test yanlış pozitif sonuçlar veriyor.
Ancak bazı durumlarda HIV PCR teşhisi vazgeçilmezdir. Genellikle yanlış negatif ELISA sonucu olan kişilere verilir. Bu tür göstergeler, bir kişinin henüz virüse karşı antikor geliştirmediğini ve sayılarında birden fazla artış olmadan tespit edilemediğini gösterir. Bu tam olarak bir PCR kan testi yaparak elde edilebilecek olan şeydir.
Bu teşhisler, HIV pozitif bir anneden doğan, yaşamın ilk yılındaki çocuklar için de gereklidir. Bu yöntem, bir çocuğun durumunu güvenilir bir şekilde belirlemenin tek yoludur.
Hepatit teşhisi için PCR
Polimeraz zincir reaksiyonu yöntemi, hepatit A, B, C virüsünün DNA'sının enfeksiyona karşı antikor oluşumundan veya hastalık semptomlarının başlamasından çok önce tespit edilmesini sağlar. Hepatit C için PCR analizi özellikle etkilidir, çünkü vakaların %85'inde bu hastalık asemptomatiktir vezamanında tedavi kronik aşamaya girer.
Patojenin zamanında tespiti, komplikasyonlardan ve uzun süreli tedaviden kaçınmaya yardımcı olacaktır.
Kapsamlı PCR incelemesi
Karmaşık PCR analizi: nedir? Bu, aynı anda çeşitli enfeksiyon türlerinin belirlenmesini içeren polimerik zincir reaksiyonu yöntemini kullanan bir incelemedir: mikoplazma genitalium, mikoplazma hominis, gardnerella vajinalis, kandida, trikomonas, sitomegalovirüs, ureaplasma urealiticum, herpes tip 1 ve 2, gonore, papillomavirüs. Bu tür teşhislerin fiyatı 2000 ila 3500 ruble arasında değişmektedir. kliniğe, kullanılan malzeme ve ekipmana ve ayrıca analiz türüne bağlı olarak: nitel veya nicel. Sizin durumunuzda gerekli olan - doktor karar verecektir. Bazı durumlarda, sadece patojenin varlığını belirlemek yeterlidir, diğerlerinde, örneğin HIV enfeksiyonu ile nicel bir titre önemli bir rol oynar. Yukarıdaki patojenlerin tümü teşhis edilirken incelemeye "PCR-12 analizi" denir.
Analiz sonuçlarının dökümü
PCR analizinin şifresini çözmek zor değil. Göstergenin sadece 2 ölçeği vardır - "olumlu sonuç" ve "olumsuz sonuç". Bir patojen tespit edildiğinde, doktorlar hastalığın varlığını %99 kesinlik ile doğrulayabilir ve hastayı tedavi etmeye başlayabilir. Enfeksiyonu belirlemek için nicel bir yöntemle ilgili sütun, tespit edilen bakterilerin sayısal göstergesini gösterecektir. Sadece bir doktor hastalığın derecesini belirleyebilir ve gerekli tedaviyi reçete edebilir.
Bazı durumlarda, örneğin, PCR ile HIV enfeksiyonunu negatif bir sonuçla belirlerken, elde edilen göstergeleri doğrulamak için ek incelemeler yapmak gerekli hale gelir.
Nerede test yaptırılır?
PCR testi nerede yapılır: kamu kliniğinde mi yoksa özel laboratuvarda mı? Ne yazık ki, belediye sağlık kurumlarında, ekipman ve yöntemler genellikle eskidir. Bu nedenle, modern ekipmana ve yüksek nitelikli personele sahip özel laboratuvarları tercih etmek daha iyidir. Ayrıca özel bir klinikte çok daha hızlı sonuç alırsınız.
Moskova'da birçok özel laboratuvar, çeşitli enfeksiyonlar için PCR analizi sunar. Örneğin Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro gibi kliniklerde PCR analizi yapılmaktadır. Muayenenin fiyatı 200 ruble. bir patojeni tanımlamak için.
Çoğu durumda PCR ile bulaşıcı hastalıkların teşhisinin, vücuttaki patojeni enfeksiyonun erken evrelerinde tespit etmenin hızlı ve güvenilir bir yolu olduğu sonucuna varılabilir. Ancak yine de, bazı durumlarda diğer teşhis yöntemlerini seçmeye değer. Böyle bir çalışmaya duyulan ihtiyacı yalnızca bir uzman belirleyebilir. PCR analizinin deşifre edilmesi de profesyonel bir yaklaşım gerektirir. Doktorunuzun tavsiyelerine uyun ve ihtiyacınız olmayan testleri yaptırmayın.
