Birçok gıda ürününün kalitatif bileşimini oluşturmak için protein için ksantoprotein reaksiyonu kullanılır. Bileşikte aromatik amino asitlerin varlığı, test numunesine pozitif bir renk değişikliği verecektir.
Protein nedir
Canlı bir organizma için yapı malzemesi olan protein olarak da adlandırılır. Proteinler kas hacmini korur, saç, deri veya bağlar olsun, çeşitli organların yaralı ve ölü doku yapılarını onarır. Onların katılımıyla kırmızı kan hücreleri üretilir, birçok hormonun ve bağışıklık sisteminin hücrelerinin normal işleyişi düzenlenir.
Bu, kütlesi 6103 d altondan büyük olan bir polipeptit olan karmaşık bir moleküldür. Protein yapısı, bir peptit bağıyla bağlanan büyük miktarlardaki amino asit kalıntılarından oluşur.
Protein yapısı
Düşük moleküler ağırlıklı pep titlerle karşılaştırıldığında bu maddelerin ayırt edici bir özelliği, farklı kaynaklardan gelen etkilerle desteklenen gelişmiş uzamsal üç boyutlu yapılarıdır.cazibe derecesi. Proteinler dört seviyeli bir yapıya sahiptir. Her birinin kendine has özellikleri var.
Moleküllerinin birincil organizasyonu, yapısı proteine karşı ksantoprotein reaksiyonu tarafından tanınan amino asit dizisine dayanır. Böyle bir yapı, periyodik olarak tekrarlanan bir peptit bağı -HN-CH-CO-'dur ve aminokarboksilik asitlerdeki yan zincir radikalleri seçici kısımdır. Gelecekte bir bütün olarak maddenin özelliklerini belirleyen onlardır.
Birincil protein yapısının yeterince güçlü olduğu kabul edilir, bunun nedeni peptit bağlarında güçlü kovalent etkileşimlerin bulunmasıdır. Sonraki seviyelerin oluşumu, ilk aşamada kurulan işaretlere bağlı olarak gerçekleşir.
Amino asit dizisinin, dönüşler arasında hidrojen bağlarının kurulduğu bir spiral halinde bükülmesi nedeniyle ikincil bir yapının oluşumu mümkündür.
Bir molekülün üçüncül organizasyon seviyesi, sarmalın bir kısmı, aralarında bir hidrojen, disülfür, kovalent veya iyonik bileşik ile her türlü bağın ortaya çıkmasıyla diğer fragmanların üzerine bindirildiğinde oluşur. Sonuç, globüller biçimindeki çağrışımlardır.
Üçüncül yapıların aralarında kimyasal bağların oluşmasıyla uzaysal düzenlenmesi, molekülün son formunun veya kuaterner seviyenin oluşmasına yol açar.
Amino asitler
Proteinlerin kimyasal özelliklerini belirlerler. Yaklaşık 20 ana amino asit vardır,farklı sekanslarda polipep titlerin bileşimine dahil edilir. Bu aynı zamanda bazik pep titlerin türevleri olan hidroksiprolin ve hidroksilizin formundaki nadir aminokarboksilik asitleri de içerir.
Protein tanımanın ksantoprotein reaksiyonunun bir işareti olarak, ayrı amino asitlerin varlığı, reaktiflerin renginde bir değişiklik verir, bu da bileşimlerinde belirli yapıların varlığını düşündürür.
Görünüşe göre, bunların hepsi hidrojen atomunun bir amino grubu ile değiştirildiği karboksilik asitlerdir.
Molekül yapısına bir örnek, en basit amino asit olarak glisinin (HNH− HCH− COOH) yapısal formülüdür.
Bu durumda, CH2- karbon hidrojenlerinden biri, bir benzen halkası, amino, sülfo, karboksi grupları dahil olmak üzere daha uzun bir radikal ile değiştirilebilir.
Ksantoprotein reaksiyonu ne anlama geliyor
Kaliteli protein analizi için farklı yöntemler kullanılır. Bunlara tepkiler dahildir:
- mor renk ile biüret;
- ninhidrin mavi-mor bir çözelti oluşturmak için;
- kırmızı lekeli formaldehit;
- Gri-siyah sedimantasyonlu folyo.
Her yöntemi uygularken, proteinlerin varlığı ve moleküllerinde belirli bir fonksiyonel grubun varlığı kanıtlanır.
Proteine karşı bir ksantoprotein reaksiyonu vardır. Mulder testi olarak da adlandırılır. Proteinler üzerindeki renk reaksiyonlarını ifade eder.aromatik ve heterosiklik amino asitlerdir.
Böyle bir testin bir özelliği, siklik amino asit kalıntılarının nitrik asit ile nitratlanması, özellikle de benzen halkasına bir nitro grubunun eklenmesidir.
Bu işlemin sonucu, çöken bir nitro bileşiğinin oluşmasıdır. Bu, bir ksantoprotein reaksiyonunun ana işaretidir.
Hangi amino asitler belirlenir
Bu test kullanılarak tüm aminokarboksilik asitler tespit edilemez. Protein tanımanın ksantoprotein reaksiyonunun ana özelliği, amino asit molekülünde bir benzen halkası veya heterosikl varlığıdır.
Protein aminokarboksilik asitlerden, içinde bir fenil grubu (fenilalanin içinde) ve bir hidroksifenil radikali (tirozinde) bulunan iki aromatik asit izole edilir.
Ksantoprotein reaksiyonu, aromatik bir indol çekirdeğine sahip olan heterosiklik amino asit triptofanı belirlemek için kullanılır. Proteinde yukarıdaki bileşiklerin varlığı, test ortamının karakteristik bir renk değişikliğini verir.
Hangi reaktifler kullanılır
Ksantoprotein reaksiyonunu gerçekleştirmek için %1'lik bir yumurta veya bitkisel protein solüsyonu hazırlamanız gerekir.
Genellikle proteini yumurta sarısından ayırmak için kırılmış bir tavuk yumurtası kullanın. Bir çözelti elde etmek için, saf su miktarının on katı içinde% 1 protein seyreltilir. Proteini çözdükten sonra, ortaya çıkan sıvı birkaç kat gazlı bezden süzülmelidir. Bu solüsyon serin bir yerde saklanmalıdır.
Reaksiyonu bitkisel protein ile gerçekleştirebilirsiniz. Çözeltiyi hazırlamak için 0,04 kg buğday unu kullanılır. 0.16 l arıtılmış su ekleyin. Malzemeler, yaklaşık + 1 ° C sıcaklıkta soğuk bir yere 24 saat yerleştirilen bir şişede karıştırılır. Bir gün sonra çözelti çalkalanır, ardından önce pamuk yünü ile sonra kağıt kıvrımlı filtre ile süzülür. Elde edilen sıvı soğuk bir yerde tutulur. Böyle bir çözümde esas olarak bir albümin fraksiyonu vardır.
Ksantoprotein reaksiyonunu gerçekleştirmek için ana reaktif olarak konsantre nitrik asit kullanılır. Ek reaktifler, %10 sodyum hidroksit veya amonyak çözeltisi, jelatin çözeltisi ve konsantre olmayan fenoldür.
Metodoloji
Temiz bir test tüpüne 2 ml miktarında %1'lik bir yumurta proteini veya un çözeltisi ekleyin. Pulların düşmesini önlemek için yaklaşık 9 damla konsantre nitrik asit eklenir. Elde edilen karışım ısıtılır, sonuç olarak çökelti sararır ve yavaş yavaş kaybolur ve rengi çözeltiye girer.
Sıvı soğuduğunda, test tüpüne duvar boyunca yaklaşık 9 damla konsantre sodyum hidroksit eklenir, bu işlem için fazlalıktır. Ortamın reaksiyonu alkali hale gelir. Tüpün içindekiler turuncuya döner.
Özellikler
Ksantoprotein, altındaki proteinlere kalitatif bir reaksiyon olarak adlandırıldığından,nitrik asidin etkisiyle test, ürünle birlikte verilen davlumbaz altında gerçekleştirilir. Konsantre kostik maddelerle çalışırken tüm güvenlik önlemlerine uyun.
Isıtma işlemi sırasında, tüpün içeriği dışarı çıkabilir, bu, tüp tutucuya sabitlenirken ve bir eğim seçilirken dikkate alınmalıdır.
Konsantre nitrik asit ve sodyum hidroksit alımı sadece cam pipet ve kauçuk ampul ile yapılmalıdır, ağızdan yazılması yasaktır.
Fenol ile karşılaştırmalı reaksiyon
İşlemi göstermek ve fenil grubunun varlığını doğrulamak için hidroksibenzen ile benzer bir test yapılır.
2 ml seyreltilmiş fenol bir test tüpüne koyun, ardından yavaş yavaş duvar boyunca 2 ml konsantre nitrik asit ekleyin. Çözelti ısıtmaya tabi tutulur ve bunun sonucunda sararır. Bu reaksiyon, bir benzen halkasının varlığı için nitelikseldir.
Hidroksibenzenin nitrik asit ile nitrasyonu işlemine, yüzde 15 ila 35 oranında bir paranitrofenol ve ortonitrofenol karışımının oluşumu eşlik eder.
Jelatin karşılaştırması
Bir proteine verilen ksantoprotein reaksiyonunun sadece aromatik yapıya sahip amino asitleri tespit ettiğini kanıtlamak için fenolik grubu olmayan proteinler kullanılır.
Temiz bir test tüpüne 2 ml miktarında %1 jelatin solüsyonu koyun. Buna yaklaşık 9 damla konsantre nitrik asit eklenir. Elde edilen karışım ısıtılır. Çözelti sararmaz, bu da yokluğunu kanıtlar.aromatik bir yapıya sahip amino asitler. Protein safsızlıklarının varlığı nedeniyle bazen ortamın hafif sararması gözlemlenir.
Kimyasal denklemler
Proteinlere ksantoprotein reaksiyonu iki aşamada gerçekleşir. İlk aşamanın formülü, bir amino asit molekülünün konsantre nitrik asit kullanılarak nitrasyonu sürecini tanımlar.
Bir örnek, nitrotirozin ve dinitrotirozin oluşturmak için tirozine bir nitro grubunun eklenmesidir. İlk durumda, benzen halkasına bir NO2-radikal bağlanır ve ikinci durumda iki hidrojen atomu NO2 ile değiştirilir.. Ksantoprotein reaksiyonunun kimyasal formülü, bir nitrotirozin molekülü oluşturmak için tirozinin nitrik asit ile etkileşimi ile temsil edilir.
Nitrasyon işlemine renksiz bir rengin sarı bir tona geçişi eşlik eder. Triptofan veya fenilalanin amino asit kalıntıları içeren proteinlerle benzer bir reaksiyon gerçekleştirirken, çözeltinin rengi de değişir.
İkinci aşamada, tirozin molekülünün nitrasyon ürünleri, özellikle nitrotirozin, amonyum veya sodyum hidroksit ile etkileşime girer. Sonuç, sarı-turuncu renkte olan sodyum veya amonyum tuzudur. Bu reaksiyon nitrotirozin molekülünün kinoit forma geçme yeteneği ile ilişkilidir. Daha sonra, çift konjuge bağlardan oluşan bir kinon sistemine sahip olan bir nitronik asit tuzu oluşur.
Proteinlere karşı ksantoprotein reaksiyonu böyle biter. Denklem İkiaşama yukarıda sunulmuştur.
Sonuçlar
Üç test tüpünde bulunan sıvıların analizi sırasında, seyreltik fenol bir referans solüsyon görevi görür. Benzen halkalı maddeler, nitrik asit ile kalitatif bir reaksiyon verir. Sonuç olarak, çözümün rengi değişir.
Bildiğiniz gibi jelatin, hidrolize formda kolajen içerir. Bu protein aromatik aminokarboksilik asitler içermez. Asit ile etkileşime girdiğinde ortamın renginde değişiklik olmaz.
Üçüncü test tüpünde, proteinlere karşı pozitif bir ksantoprotein reaksiyonu gözlemlenir. Sonuç şu şekilde çıkarılabilir: İster fenil grubu ister indol halkası olsun, aromatik yapıya sahip tüm proteinler, çözeltiye renk değişikliği verir. Bunun nedeni sarı nitro bileşiklerinin oluşmasıdır.
Renk reaksiyonu gerçekleştirmek, amino asitlerde ve proteinlerde çeşitli kimyasal yapıların varlığını kanıtlar. Jelatin örneği, fenil grubu veya siklik yapısı olmayan aminokarboksilik asitler içerdiğini göstermektedir.
Ksantoprotein reaksiyonu, güçlü nitrik asit uygulandığında cildin sararmasını açıklayabilir. Süt köpüğü ile böyle bir analiz yapıldığında aynı rengi alacaktır.
Tıbbi laboratuvar uygulamasında, bu renk örneği idrardaki proteini saptamak için kullanılmaz. Bunun nedeni idrarın kendisinin sarı rengidir.
Ksantoprotein reaksiyonu, çeşitli proteinlerdeki triptofan ve tirozin gibi amino asitleri ölçmek için giderek daha fazla kullanılmaktadır.
