Hemen hemen tüm enfeksiyon hastalıklarının laboratuvar teşhisi, hastanın kanında patojenin antijenlerine karşı üretilen antikorların serolojik reaksiyon yöntemleriyle saptanmasına dayanır. On dokuzuncu yüzyılın sonlarından yirminci yüzyılın başlarına kadar tıp pratiğine girdiler.
Bilimin gelişmesi, mikropların antijenik yapısını ve toksinlerinin kimyasal formüllerini belirlemeye yardımcı oldu. Bu, sadece terapötik değil, aynı zamanda tanısal serumlar yaratmayı mümkün kıldı. Zayıflatılmış patojenlerin laboratuar hayvanlarına uygulanmasıyla elde edilirler. Birkaç gün maruz kaldıktan sonra, serolojik testler kullanılarak mikropları veya toksinlerini tanımlamak için kullanılan müstahzarları hazırlamak için tavşanların veya farelerin kanı kullanılır.
Böyle bir reaksiyonun dışsal tezahürü, oluşum koşullarına ve hastanın kanındaki antijenlerin durumuna bağlıdır. Mikrobiyal partiküller çözünmez ise serumda çökelir, parçalanır, bağlanır veya hareketsiz hale gelir. Antijenler çözünürse, nötralizasyon veya çökelme fenomeni ortaya çıkar.
Aglutinasyon reaksiyonu (RA)
Serolojik aglütinasyon testi oldukça spesifiktir. Gerçekleştirmek kolaydır ve oldukçagörsel, hastanın kan serumunda antijenlerin varlığını hızlı bir şekilde belirlemek için. Vidal reaksiyonunu (tifo ve paratifo ateşi teşhisi) ve Weigl'i (tifo ateşi) test etmek için kullanılır.
İnsan antikorları (veya aglutininler) ve mikrobiyal hücreler (aglutenojenler) arasındaki spesifik etkileşime dayanır. Etkileşimlerinden sonra, çöken parçacıklar oluşur. Bu olumlu bir işaret. Reaksiyonu kurmak için canlı veya öldürülmüş mikrobiyal ajanlar, mantarlar, protozoa, kan hücreleri ve somatik hücreler kullanılabilir.
Kimyasal olarak, reaksiyon iki adıma ayrılır:
- Antikorların (AT) antijenlerle (AG) spesifik bağlantısı.
- Spesifik olmayan - AG-AT konglomeralarının çökelmesi, yani aglütinat oluşumu.
Dolaylı Aglütinasyon Reaksiyonu (IPHA)
Bu tepki öncekinden daha hassastır. Bakterilerin, hücre içi parazitlerin ve protozoaların neden olduğu hastalıkları teşhis etmek için kullanılır. O kadar spesifiktir ki çok düşük konsantrasyonlarda antikorlar bile tespit edilebilir.
Saflaştırılmış koyun eritrositleri ve antikorlar veya antijenlerle ön işleme tabi tutulmuş insan kırmızı kan hücreleri, üretimi için kullanılır (laboratuvar teknisyeninin ne bulmak istediğine bağlı olarak). Bazı durumlarda, insan kırmızı kan hücreleri immünoglobulinlerle tedavi edilir. Eritrositlerin serolojik reaksiyonları, tüpün dibine yerleşmişlerse gerçekleşmiş sayılır. Olumlu bir tepki hakkındahücrelerin, tüm tabanı kaplayan, ters çevrilmiş bir şemsiye şeklinde düzenlendiğini söyleyin. Eritrositler bir sütuna veya tabanın ortasına bir düğme şeklinde yerleşirse negatif bir reaksiyon sayılır.
Çökeltme reaksiyonu (RP)
Bu tip serolojik reaksiyonlar, son derece küçük antijen parçacıklarını tespit etmek için kullanılır. Bunlar örneğin proteinler (veya parçaları), lipidler veya karbonhidratlar içeren protein bileşikleri, bakteri parçaları, bunların toksinleri olabilir.
Reaksiyon için seralar, genellikle tavşanlar olmak üzere hayvanlara yapay olarak bulaştırılarak elde edilir. Bu yöntemle kesinlikle herhangi bir çökeltici serum elde edebilirsiniz. Serolojik çökelme reaksiyonlarının ayarı, etki mekanizmasında aglütinasyon reaksiyonlarına benzer. Serumda bulunan antikorlar, kolloidal bir solüsyonda antijenlerle birleşerek, tüpün dibinde veya substrat (jel) üzerinde biriken büyük protein molekülleri oluşturur. Bu yöntem oldukça spesifik olarak kabul edilir ve ihmal edilebilir miktarlardaki bir maddeyi bile tespit edebilir.
Veba, tularemi, şarbon, menenjit ve diğer hastalıkları teşhis etmek için kullanılır. Ayrıca adli tıp muayenesine katılıyor.
Jel çökeltme reaksiyonu
Serolojik reaksiyonlar sadece sıvı ortamda değil, agar jelde de gerçekleştirilebilir. Buna yaygın yağış yöntemi denir. Yardımı ile karmaşık antijenik karışımların bileşimi incelenir. Bu yöntem, antijenlerin antikorlara kemotaksisine ve bunun tersine dayanır. Bir jelde hareket ederlerfarklı hızlarda birbirine doğru ve buluşarak yağış çizgileri oluşturur. Her satır bir AG-AT kümesidir.
Antitoksin (PH) ile ekzotoksin nötralizasyon reaksiyonu
Antitoksik serumlar, mikroorganizmalar tarafından üretilen ekzotoksinin etkisini nötralize edebilir. Bu serolojik reaksiyonlar buna dayanmaktadır. Mikrobiyoloji, serumları, toksinleri ve toksoidleri titre etmek ve bunların terapötik aktivitelerini belirlemek için bu yöntemi kullanır. Toksin nötralizasyonunun gücü geleneksel birimler tarafından belirlenir - AE.
Ayrıca bu reaksiyon sayesinde ekzotoksinin türünü veya türünü belirlemek mümkündür. Tetanoz, difteri, botulizm tanısında kullanılır. Çalışma hem "cam üzerinde" hem de jel içinde gerçekleştirilebilir.
Lizis tepkimesi (RL)
Hastanın vücuduna giren bağışıklık serumu, temel işlevi olan pasif bağışıklığın yanı sıra parçalayıcı özelliklere de sahiptir. Hastanın vücuduna giren mikrobiyal ajanları, hücresel yabancı elementleri ve virüsleri çözebilir. Serumda bulunan antikorların özgüllüğüne bağlı olarak bakteriyolizinler, sitolizinler, spiroketolizinler, hemolizinler ve diğerleri izole edilir.
Bu spesifik antikorlara "tamamlayıcı" denir. Hemen hemen tüm insan vücut sıvılarında bulunur, karmaşık bir protein yapısına sahiptir ve sıcaklık artışına, sarsıntıya, asitlere ve doğrudan güneş ışığına karşı son derece hassastır. Ancak kurutulmuş halde tutabilir altı aya kadar parçalama özellikleri.
Bu tip serolojik reaksiyonlar vardır:
- bakteriyoliz;
- hemoliz.
Bakterioliz, hastanın kan serumu ve canlı mikroplar içeren spesifik bağışıklık serumu kullanılarak gerçekleştirilir. Kanda yeterli tamamlayıcı varsa, araştırmacı bakterinin parçalandığını görecek ve reaksiyon pozitif olarak değerlendirilecektir.
Kanın ikinci serolojik reaksiyonu, hastanın kırmızı kan hücrelerinin bir süspansiyonunun, yalnızca belirli bir iltifat varlığında aktive olan hemolizinler içeren serumla tedavi edilmesidir. Varsa, laboratuvar asistanı kırmızı kan hücrelerinin çözünmesini gözlemler. Bu reaksiyon, modern tıpta kan serumundaki kompleman titresini (yani eritrosit lizizini tetikleyen en küçük miktarını) belirlemek ve kompleman fiksasyonu için bir analiz yapmak için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu şekilde sifiliz için serolojik bir test yapılır - Wasserman reaksiyonu.
Tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu (CFR)
Bu reaksiyon, hastanın kan serumundaki enfeksiyöz bir ajana karşı antikorları tespit etmek ve ayrıca patojeni antijenik yapısıyla tanımlamak için kullanılır.
Bu noktaya kadar basit serolojik reaksiyonları tanımladık. RSK, karmaşık bir reaksiyon olarak kabul edilir, çünkü iki değil, üç element etkileşime girer: antikor, antijen ve tamamlayıcı. Özü, antikor ve antijen arasındaki etkileşimin olması gerçeğinde yatmaktadır.sadece oluşan AG-AT kompleksinin yüzeyinde adsorbe edilen kompleman proteinlerinin varlığında meydana gelir.
Antijenlerin kendileri, kompleman ilavesinden sonra, reaksiyonun kalitesini gösteren önemli değişikliklere uğrarlar. Parçalama, hemoliz, immobilizasyon, bakterisidal veya bakteriyostatik etki olabilir.
Reaksiyonun kendisi iki aşamada gerçekleşir:
- Kontrol eden kişi tarafından görsel olarak görülemeyen bir antijen-antikor kompleksi oluşumu.
- Tamamlayıcı etkisi altında antijende değişiklik. Bu aşama çoğunlukla çıplak gözle izlenebilir. Reaksiyon görsel olarak görünmüyorsa değişiklikleri belirlemek için ek bir gösterge sistemi kullanılır.
Gösterge sistemi
Bu reaksiyon kompleman fiksasyonuna dayanır. Saflaştırılmış ram eritrositler ve tamamlayıcı içermeyen hemolitik serum, RSC ayarlandıktan bir saat sonra test tüpüne eklenir. Test tüpünde bağlanmamış bir kompleman kalırsa, koyun kan hücreleri ile hemolizin arasında oluşan AG-AT kompleksine katılarak bunların çözülmesine neden olur. Bu, RSK'nın negatif olduğu anlamına gelir. Eritrositler sağlam kaldıysa, buna göre reaksiyon pozitiftir.
Hemaglutinasyon testi (RGA)
Temel olarak farklı iki hemaglütinasyon reaksiyonu vardır. Bunlardan biri serolojiktir, kan gruplarını belirlemek için kullanılır. Bu durumda, kırmızı kan hücreleri antikorlarla etkileşime girer.
Ve ikincisikırmızı kan hücreleri virüsler tarafından üretilen hemaglutininlerle reaksiyona girdiğinden, reaksiyon serolojik için geçerli değildir. Her patojen sadece belirli eritrositlere (tavuk, kuzu, maymun) etki ettiğinden, bu reaksiyon oldukça spesifik olarak kabul edilebilir.
Test tüpünün altındaki kan hücrelerinin konumundan bir reaksiyonun pozitif mi yoksa negatif mi olduğunu anlayabilirsiniz. Desenleri ters çevrilmiş bir şemsiyeye benziyorsa, istenen virüs hastanın kanında bulunur. Ve tüm eritrositler bir madeni para sütunu gibi oluşmuşsa, istenen patojenler yoktur.
Hemaglutinasyon inhibisyon testi (HITA)
Bu, virüslerin tipini, tipini veya hastanın kan serumunda spesifik antikorların varlığını belirlemenizi sağlayan oldukça spesifik bir reaksiyondur.
Özü, test materyali ile birlikte test tüpüne eklenen antikorların, antijenlerin eritrositler üzerinde birikmesini önleyerek hemaglütinasyonu durdurmasında yatmaktadır. Bu, aranan spesifik virüs için kanda spesifik antijenlerin varlığının niteliksel bir işaretidir.
İmmünofloresan reaksiyon (RIF)
Reaksiyon, florokrom boyalarla muamele edildikten sonra floresan mikroskopi ile AG-AT komplekslerini tespit etme yeteneğine dayanmaktadır. Bu yöntemin kullanımı kolaydır, saf kültürün izolasyonunu gerektirmez ve çok az zaman alır. Bulaşıcı hastalıkların hızlı teşhisi için vazgeçilmezdir.
Pratikte, bu serolojik reaksiyonlar iki türe ayrılır: doğrudan ve dolaylı.
Doğrudan RIF,floresan serum ile ön işleme tabi tutulan antijen. Dolaylı olan ise, önce ilacın, ilgili antikorlar için antijenler içeren geleneksel bir teşhis ile tedavi edilmesi ve ardından AG-AT kompleksinin proteinlerine özgü lüminesan serumun yeniden uygulanması ve mikrobiyal hücrelerin yeniden uygulanmasıdır. mikroskop altında görünür hale gelir.
