Bakterilerin incelenmesi insanlar için büyük pratik öneme sahiptir. Bugüne kadar, birbirinden patojenite, dağılım alanı, şekil, boyut, kamçı sayısı ve diğer parametrelerde farklılık gösteren çok sayıda prokaryot keşfedilmiştir. Bu suşu ayrıntılı olarak incelemek için bakteriyolojik bir araştırma yöntemi kullanılır.
Bakteri hücrelerini analiz etme yöntemleri nelerdir?
Bakterilerin patojen olup olmadığını belirlemek için kültür çeşitli şekillerde incelenir. Aralarında:
1. Bakteriyoskopik yöntem.
2. Bakteriyolojik yöntem.
3. Biyolojik yöntem.
Bakteriyoskopik ve bakteriyolojik araştırma yöntemleri, bu tür hücrelerin deney hayvanlarının canlı organizması üzerindeki etkisini incelemek için biyolojik analiz gerektiğinde, doğrudan prokaryotik hücrelerle çalışmaya dayanır. Hastalığın belirli belirtilerinin tezahür derecesine göre, bilim adamı şunları yapabilir:örnekte patojenik bakterilerin varlığı veya yokluğu hakkında bir sonuca varmak, ayrıca kültürlerini elde etmek ve diğer çalışmalarda kullanmak için bunları hayvanın vücudunda doğal olarak çoğ altın.
Bakteriyolojik araştırma yöntemi bakteriyoskopik olandan farklıdır. İlkinde, analiz için özel olarak hazırlanmış bir canlı prokaryot kültürü kullanılırken, ikincisinde, bir cam slayt üzerinde ölü veya canlı hücrelerle çalışma gerçekleştirilir.
Bakteriyolojik araştırma yönteminin aşamaları. Mikrobiyoloji
Bakteri kültürünün özelliklerini inceleme ilkesi, hem prokaryotik hücreleri inceleme hedefini belirlemiş mikrobiyologlar hem de görevi bakterilerin patojenitesini veya patojenik olmama durumunu belirlemek olan laboratuvar teknisyenleri için yararlı olabilir ve sonra hastayı teşhis edin.
Bakterileri inceleme yöntemi üç aşamaya ayrılır:
1. Orijinal numuneden bakteri izolasyonu.
2. Bakteri ekmek ve saf bir kültür yetiştirmek, özelliklerini incelemek.
3. Bakteri hücrelerinin detaylı çalışması.
İlk aşama
Örnek veya yayma, ortamın serbest yüzeyinden veya hastadan alınır. Böylece, bir besin ortamına ekilmesi gereken birçok bakteri türünden bir "kokteyl" elde ederiz. Bazen vücuttaki dağılım odaklarını bilerek gerekli bakterileri hemen izole etmek mümkün olur.
İki veya üç gün sonra istenen koloniler seçilir vesteril bir öze yardımıyla Petri kaplarının katı besiyerlerine ekilir. Birçok laboratuvar, katı veya sıvı besin ortamı içerebilen test tüpleri ile çalışır. Mikrobiyolojide bakteriyolojik araştırma yöntemi bu şekilde gerçekleştirilir.
İkinci aşama
Ayrı bakteri kolonileri elde edildikten sonra, doğrudan bir makro ve mikro analiz gerçekleştirilir. Kolonilerin tüm parametreleri ölçülür, her birinin rengi ve şekli belirlenir. Bir Petri kabındaki ve ardından başlangıç materyalindeki kolonileri saymak alışılmadık bir durum değildir. Bu, sayısı hastalığın derecesine bağlı olan patojenik bakterilerin analizinde önemlidir.
2. aşaması tek tek mikroorganizma kolonilerini incelemek olan bakteriyolojik araştırma yöntemi, bakterileri analiz etmek için biyolojik bir yöntemle ilişkilendirilebilir. Bu aşamada çalışmanın bir diğer amacı da kaynak materyal miktarını artırmaktır. Bu, bir besin ortamında yapılabilir veya canlı deneysel organizmalar üzerinde in vivo bir deney yapabilirsiniz. Patojenik bakteriler çoğalacak ve bunun sonucunda kan milyonlarca prokaryotik hücre içerecektir. Alınan kandan bakterilerin gerekli çalışma materyalini hazırlamak kolaydır.
Üçüncü aşama
Çalışmanın en önemli kısmı bakteri kültürünün morfolojik, biyokimyasal, toksijenik ve antijenik özelliklerinin belirlenmesidir. Çalışma, bir besin ortamında önceden temizlenmiş kültürlerle ve ayrıca mikroskop altında müstahzarlar (genellikle boyanmış) ile gerçekleştirilir.
Sahipliği ayarlapatojenik veya fırsatçı bakterilerin bir veya başka sistematik gruba, ayrıca ilaçlara karşı dirençlerini belirlemeye, bakteriyolojik araştırma yöntemine izin verir. Aşama 3 - antibiyotikler, yani. ortamdaki ilaç içeriği koşullarında bakteri hücrelerinin davranışının analizi.
Bir kültürün antibiyotik direncinin incelenmesi, belirli bir hasta için gerekli ve en önemlisi etkili ilaçları reçete etmek gerektiğinde büyük pratik öneme sahiptir. Bakteriyolojik araştırma yönteminin yardımcı olabileceği yer burasıdır.
Büyüme ortamı nedir?
Gelişme ve üreme için bakterilerin önceden hazırlanmış besin ortamlarında olması gerekir. Tutarlılığa göre sıvı veya katı olabilirler ve kökenlerine göre - bitkisel veya hayvansal.
Temel medya gereksinimleri:
1. Kısırlık.
2. Maksimum şeffaflık.
3. Asitlik, ozmotik basınç, su aktivitesi ve diğer biyolojik değerlerin optimal göstergeleri.
İzole koloniler elde etme
1. Drygalsky yöntemi. Bakteriyel halkaya çeşitli mikroorganizma türlerine sahip bir yaymanın uygulanması gerçeğinden oluşur. Bu döngü, bir besin ortamı ile ilk Petri kabı boyunca geçirilir. Ayrıca, döngü değiştirilmeden, ikinci ve üçüncü Petri kaplarında artık malzeme yöntemi gerçekleştirilir. Böylece, koloninin son numunelerinde bakteri çok yoğun tohumlanmayacak, böylece iş için gerekli olanları bulma yeteneği basitleştirilecektir.bakteri.
2. Koch yöntemi. Erimiş besin ortamına sahip test tüpleri kullanır. Buraya bakteri bulaşmış bir halka veya pipet yerleştirilir, ardından test tüpünün içeriği özel bir plaka üzerine dökülür. Agar (veya jelatin) bir süre sonra katılaşır ve kalınlığında istenilen hücre kolonilerini bulmak kolaydır. Mikroorganizma konsantrasyonunun çok yüksek olmaması için çalışmaya başlamadan önce test tüplerindeki bakteri karışımını seyreltmek önemlidir.
Aşamaları istenen bakteri kültürünün izolasyonuna dayanan bakteriyolojik araştırma yöntemi, izole kolonileri bulmak için bu iki yöntem olmadan yapamaz.
Antibiyogram
Görsel olarak, bakterilerin ilaçlara tepkisi iki pratik yolla görülebilir:
1. Kağıt disk yöntemi.
2. Sıvı bir ortamda bakteri ve antibiyotik üremesi.
Kağıt disk yöntemi, katı bir besin ortamında büyütülmüş bir mikroorganizma kültürü gerektirir. Böyle bir ortama antibiyotiklere batırılmış birkaç parça yuvarlak kağıt koyun. İlaç, bakteri hücrelerinin nötralizasyonu ile başarılı bir şekilde baş ederse, böyle bir tedaviden sonra kolonilerden yoksun bir alan olacaktır. Antibiyotiğe tepki negatifse bakteri hayatta kalır.
Sıvı bir besin ortamı kullanılması durumunda, önce farklı dilüsyonlarda bakteri kültürü içeren birkaç test tüpü hazırlayın. Bu test tüplerine antibiyotikler eklenir ve gün içerisinde madde ile mikroorganizmalar arasındaki etkileşim süreci gözlemlenir. Sonuç olarak, mümkün olduğu kadar yüksek kaliteli bir antibiyogram elde edilir. Belirli bir ürün için ilacın etkinliğini değerlendirin.
Analizin ana görevleri
Burada bakteriyolojik araştırma yönteminin hedefleri ve aşamaları listelenir.
1. Bakteri kolonilerini izole etmek için kullanılacak başlangıç materyalini edinin. Herhangi bir nesnenin yüzeyinden, mukoza zarından veya bir insan organının boşluğundan bir bulaşma, kan testi olabilir.
2. Katı bir besin ortamında kültürün yetiştirilmesi. 24-48 saat sonra, Petri kabında farklı türde bakteri kolonileri bulunabilir. Morfolojik ve/veya biyokimyasal kriterlere göre istenileni seçip onunla daha ileri çalışmalar yapıyoruz.
3. Elde edilen kültürün yayılması. Bakteriyolojik araştırma yöntemi, bakteri kültürlerinin sayısını artırmaya yönelik mekanik veya biyolojik bir yönteme dayanabilir. İlk durumda, bakterilerin bir termostatta çoğaldığı ve yeni koloniler oluşturduğu katı veya sıvı besin ortamı ile çalışma gerçekleştirilir. Biyolojik yöntem, bakteri sayısını artırmak için doğal koşullar gerektirir, bu nedenle burada deney hayvanı mikroorganizmalarla enfekte olur. Birkaç gün sonra, bir kan örneğinde veya yaymada birçok prokaryot bulunabilir.
4. Saf kültürle çalışmak. Bakterilerin sistematik konumunun yanı sıra patojenlere ait olduklarını belirlemek için, morfolojik ve biyokimyasal özelliklere göre hücrelerin kapsamlı bir analizini yapmak gerekir. Patojenik mikroorganizma gruplarını incelerken, bilmek önemlidirantibiyotikler ne kadar etkilidir.
Bu, bakteriyolojik araştırma yönteminin genel bir özelliğiydi.
Analizin özellikleri
Bakteriyolojik araştırmanın ana kuralı maksimum sterilitedir. Test tüpleriyle çalışıyorsanız, bakteri kültürleri ve alt kültürleri yalnızca ısıtılmış bir ispirto lambası üzerinde yapılmalıdır.
Bakteriyolojik araştırma yönteminin tüm aşamaları, özel bir döngü veya Pasteur pipeti kullanılmasını gerektirir. Her iki alet de bir alkol lambasının alevinde ön işleme tabi tutulmalıdır. Pasteur pipetine gelince, burada termal sterilizasyondan önce pipetin ucunu cımbızla kırmak gerekir.
Bakteri tohumlama tekniğinin de kendine has özellikleri vardır. İlk olarak, katı besiyerine aşılama yapılırken, agarın yüzeyinden bir bakteri halkası geçirilir. Döngü, elbette, yüzeyde zaten bir mikroorganizma örneğine sahip olmalıdır. Kültür ortamına aşılama da uygulanmaktadır, bu durumda ilmek veya pipet Petri kabının dibine ulaşmalıdır.
Sıvı ortamla çalışırken test tüpleri kullanılır. Burada sıvıların laboratuvar cam eşyalarının veya tıpaların kenarlarına temas etmemesini ve kullanılan aletlerin (pipet, ilmek) yabancı cisimlere ve yüzeylere temas etmemesini sağlamak önemlidir.
Biyolojik araştırma yönteminin önemi
Bakteri örneği analizinin pratik uygulamaları vardır. Önceliklebakteriyolojik araştırma yöntemi tıpta kullanılabilir. Örneğin, doğru tanıyı koymak ve doğru tedavi sürecini geliştirmek için hastanın mikroflorasını incelemek gerekir. Burada ilaçların patojene karşı etkinliğini gösteren bir antibiyogram yardımcı olur.
Bakteri analizi, laboratuvarda tüberküloz, tekrarlayan ateş veya bel soğukluğu gibi tehlikeli hastalıkları tespit etmek için kullanılır. Ayrıca bademciklerin, organ boşluklarının bakteriyel bileşimini incelemek için kullanılır.
Çevrenin kontaminasyonunu belirlemek için bakteriyolojik araştırma yöntemi kullanılabilir. Bir nesnenin yüzeyinden bir lekenin nicel ve nitel bileşimi hakkındaki verilere göre, bu ortamın mikroorganizmalar tarafından popülasyon derecesi belirlenir.
